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在一些微生物实验室或者需要无菌操作的场所，想了解灭菌的具体效果就需要生物指示物的帮助。通常灭菌指的是用物理或化学的方式将目标微生物全部杀灭，使之达到无菌保障水平，一般最常用的有化学试剂、射线、湿热、干热以及过滤等除菌手段。针对不同的微生物采用的方法也不一样。而想要验证这些方法的效果，就需要一些具有灭菌耐受力的活微生物作为指示物来进行判断。

今天我们要讲的枯草芽孢杆菌黑色变种主要用于各类医疗机构及制药工业领域的消毒效果验证中，其原理是经过灭菌处置后含有枯草芽孢杆菌黑色变种的水样在通过孔径为0.45um的滤膜后，细菌和芽孢被截留在滤膜上，然后将滤膜置于酪氨酸琼脂培养基上，36℃±1℃培养72h-96h，枯草芽孢杆菌黑色变种产生的酪氨酸酶可分解并利用酪氨酸形成黑色素，产生黑色的特征菌落。对特征菌落进行染色镜检后通过生化试验做进一步鉴定，能利用甘油和甘露糖，可还原硝酸盐和水解淀粉，不能利用苦杏仁苷和甘露醇，并确认为革兰氏阳性芽孢杆菌的特征菌落为枯草芽孢杆菌黑色变种，鉴定结果为阳性。

检测所用试剂>

1.酪氨酸琼脂培养基。

2.营养琼脂培养基。

3.淀粉培养基和碘液。

4.硝酸盐还原培养基和相关试剂。

5.甘油复红肉汤培养基。

6.甘露糖生化培养基。

7.甘露醇生化培养基。

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8.苦杏仁苷生化培养基。

9.革兰氏染色液。

10.芽孢染色液。

11.阴性对照菌：如地衣芽孢杆菌。

12.阳性对照菌：枯草芽孢杆菌黑色变种。

13.枯草芽孢杆菌黑色变种芽孢悬液

按照《消毒技术规范》的规定制备，也可购买浓度范围在106CFU/ml-109CFU/ml之间的市售枯草芽孢杆菌黑色变种芽孢悬液。

14.无菌滤膜：直径50mm，孔径0.45μm的醋酸纤维滤膜。

按无菌操作要求包扎，经121℃高压蒸汽灭菌20min，晾干备用；或将滤膜放入烧杯中，加入实验用水，煮沸灭菌3次，15min/次，前2次煮沸后需换水洗涤2-3次。也可采用市售的无菌滤膜。

15.石蜡质封口膜。

16.无菌水：取适量实验级纯水，经121 ℃高压蒸汽灭菌20 min，备用。

检测所需试剂>

1.样品瓶：螺口带盖或磨口具塞的250ml、500ml广口玻璃瓶。

2.恒温培养箱：36℃±1℃。

3.高压蒸汽灭菌器：121℃，可调。

4.pH计：准确到0.1pH单位或更高精度。也可使用pH精密试纸。

5.显微镜：物镜4×或5×、10×、20×、40×，油镜100×，目镜10×或15×。

6.分析天平：实际分度值0.0001g。

7.培养皿：直径90mm。

8.过滤装置：配有砂芯滤器、圆筒形玻璃漏斗和真空泵，抽滤压力不低于-50kPa。

9.接种环：直径1mm-3mm。

10.镊子：不锈钢或一次性无菌塑料镊子。

11.刻度移液管：1ml、10ml。也可使用可调式移液器。

12.量筒：100ml。

13.锥形瓶：100ml。

14.酒精灯。

15.试管：10ml。

16.无菌操作设备：无菌室、超净工作台、生物安全柜。

17.一般实验室常用仪器和设备。

水样采集>

评价使用高温高压灭菌设备的灭菌效果时，取样品瓶，加入枯草芽孢杆菌黑色变种芽孢悬液及200ml无菌水使混合液中枯草芽孢杆菌黑色变种芽孢终浓度达到5×104CFU/ml-5×105CFU/ml。灭菌处置完毕后，取出样品瓶，对水样进行灭菌生物指示物（枯草芽孢杆菌黑色变种）的检测。

评价使用其它灭菌设备的灭菌效果时，灭菌前取适量枯草芽孢杆菌黑色变种芽孢悬液加入灭菌设备，使水样中枯草芽孢杆菌黑色变种芽孢终浓度达到5×104CFU/ml-5×105CFU/ml。灭菌处置完毕后，从灭菌设备中采集水样，进行灭菌生物指示物（枯草芽孢杆菌黑色变种）的检测。采样量一般为样品瓶容量的80%左右，不得用样品洗涤样品瓶。样品采集完毕后，迅速用无菌包装纸包扎样品瓶。

样品采集后宜在2h内检测，否则应在10℃以下冷藏保存运输，但不得超过6h。实验室接收样品后，不能立即开展检测的，样品应在4℃以下冷藏保存，并在2h内检测。

水样过滤>

用无菌镊子以无菌操作夹取无菌滤膜贴放在已灭菌的过滤装置上，固定好过滤装置。将样品充分混匀后取100 ml 抽滤，以无菌水冲洗滤器内壁2-3 次。样品过滤完成后，再抽气约5s，关上开关。过滤前按照无菌操作要求调节样品的pH值至7.0-8.0。

培养流程>

用灭菌镊子夹取滤膜移放在酪氨酸琼脂培养基上，滤膜截留细菌面向上，滤膜应与培养基完全贴紧，两者间不得留有气泡，然后用石蜡质封口膜封好培养皿，倒置培养皿，放入恒温培养箱内，36℃±1℃培养72h-96h。

培养96h后，如培养基上未有菌落生长，则试验终止；如培养基上有菌落生长，则挑取黑色的特征菌落于营养琼脂培养基上，36℃±1℃培养24h，待鉴定。同时将已挑菌落的酪氨酸琼脂培养基培养皿储存于2℃-5℃，以备必要时复查。

染色镜检>

挑取黑色或可疑菌落，分别使用革兰氏染色液和芽孢染色液染色，枯草芽孢杆菌黑色变种革兰氏染色镜检以及芽孢染色镜检可以参考相关镜检图，枯草芽孢杆菌黑色变种为革兰氏阳性菌，营养细胞呈杆状，单个或呈短链状排列。

生化实验>

挑取黑色或可疑菌落，分别接种到淀粉培养基、硝酸盐还原培养基、甘油复红肉汤培养基、甘露糖生化培养基、甘露醇生化培养基和苦杏仁苷生化培养基上。

空白对照实验>

用无菌水按照过滤和培养步骤进行操作；培养96h后平板培养基上应无菌落生长，否则，该次样品鉴定结果无效，应查明原因后重新采样和检测。

阴性及阳性对照>

将阴性对照菌和阳性对照菌制成浓度为40CFU/L-600CFU/L的菌悬液，分别按照过滤、培养、实验的步骤操作。阴性、阳性对照菌呈现的生化反应结果应与参照表所列结果一致，否则该次水样鉴定结果无效，此时查明原因后重新采样和检测。

结果判断>

100ml水样中检出枯草芽孢杆菌黑色变种，即可断定灭菌不合格；而如果在100mL水样中未检出枯草芽孢杆菌黑色变种，可评价为灭菌合格。

2018年度社会化推荐辽宁省三八红旗手

申报人事迹

（第二组 20号至35号 ）

20. 才绍茹

凌海市得康养鸡专业合作社理事长

才绍茹白手起家，艰苦创业，从购买300只鸡雏开始步入了养殖行业，从开办养殖厂到成立得康养鸡专业合作社，她从一名普通妇女成长为合作社理事长，带动周边乡亲共同致富发展。她把养殖场发展成了合作社的养殖示范基地，建成全自动机械化现代化鸡舍。她免费举办讲座，为养殖户提供技术支持，带动周边数百名农户加入养鸡行业共同致富发展。才绍茹的得康合作社党支部被辽宁省委评为“农民专业合作社党建示范社”。

21. 孙玉敏

锦州市太和区新民乡杨兴小学教导主任

孙玉敏既是一名教师也曾是一名军嫂，荣获“优秀军嫂”光荣称号，参加工作以来，她一直工作奋斗在教学第一线，所带班级连续四年被锦州市教育局评为“三好班级”，被锦州市评为首届“最美乡村教师”，并荣获锦州市“五一劳动奖章”，为了班级30多个孩子，她把自己的孩子全托在幼儿园，忍着严重的腰部脱臼，从不耽误学生一节课。她曾两年如一日照顾一位八十三岁高龄的孤寡老人，直到老人终老。她的事迹被《辽宁商报》和《锦州晚报》报道。2018年，她加入了“锦州市星星之火爱心协会”，为困难群众提供更多帮扶。

22. 周达岸

锦州医科大学附属第三医院副院长

周达岸20多年来致力于临床及科研工作，承担多项省、市级科研课题，多次获得省市级科研成果奖、科技进步奖。2014年带领科室挂牌辽宁省工伤康复定点中心，2015年成立康复中心，科室被评为省级重点专科。2014年成立达岸劳模创新工作室，围绕重点难点问题开展创新和攻关活动，开展公益知识讲座40余场次，听众达3000多人；在市政协委员履职期间，组织锦州市青少年脊柱侧凸筛查活动，并撰写调研报告。她的事迹多次在市级以上媒体公开报道。

23. 董颖

营口市西市区滨海街道办事处鑫海社区书记

自2011年担任金牛山社区书记开始，董颖就立志要成为百姓心中的暖心人，患病大手术仅仅休息了两天，顶着6、7厘米的刀口的伤痛仍然坚持在岗位上工作。她坚持以人为本,以服务群众和维护群众利益为目标，创建了“和谐号——党群直通车”8个新载体，做到服务群众不落一人，宣传教育不差一课。传递正能力量，贴近民心，建立《鑫海家事》栏目，用视频的方式记录基层百姓的动态，通过网络传播正能量，节目播出第一期就迎来了广泛好评。

24. 张欣

营口市西市区滨海街道办事处丽湖社区书记

在社区书记的工作岗位上恪尽职守，开拓创新，她坚持以“党政所急、妇女所需、妇联所能”三维交汇点为工作立足点，加强了“网上妇联”建设，提升了妇联工作的时代感和吸引力，并逐渐形成了“线下策划、线上互动交流、线下执行”的创新工作模式，吸引了更多女性和家庭参与其中，使妇联工作最大限度地覆盖到社区内每一个妇女群众。

25. 孙涛

大石桥市建一镇铜匠峪村党支部第一书记

2018年，孙涛作为省第二批选派到乡镇和村工作的干部，被组织安排到铜匠峪村担任村党支部第一书记。她扎根基层助力乡村振兴发展，被村民亲切地称为“最可爱的女书记”。她千方百计为谷森中草药合作社和树宇蔬菜合作社找销路，破解了积压两年6000斤中草药材和90亩近百万斤反季大白菜的销售难题；竭尽全力帮助患病村民筹集住院费；联系爱心企业投资16万元将村小学校舍修缮一新；积极协调相关部门为村里打深水井，解决村民吃水难问题。引进“盛京满绣”孵化车间项目，通过“政策支持+绣工培训+绣工技术入股+产品回收”的运作模式开展工作，绣工日工资不低于70元，对全村67户贫困户实现全覆盖。2018年11月，铜匠峪村代表大石桥市接受全省脱贫攻坚成效第三方评估检查，铜匠峪村高质量脱贫摘帽。

26. 关玉萍

辽阳市太子河区祁家镇水泉村民委员会妇联主席

关玉萍经常深入群众家中，了解妇女家庭情况和生活需求。她率先垂范，通过种植示范田带领百姓共同致富。凡是选用新的种植品种和方法她都最先试用，成功后再向群众推广，减轻了群众的心理负担，也减少了群众的经济损失，农民收入明显提高。关玉萍十分注重家庭、家教、家风，夫妻二人和睦相处，共同孝老爱亲。她非常重视对孩子思想道德品质和学习生活习惯的培养，通过言传身教培养孩子吃苦耐劳精神，弘扬新时代好家风。

27. 刘晓辉

铁岭市第六中学教务处主任

刘晓辉24年如一日，兢兢业业在基础教育领域工作奉献。她注重发挥特级教师的示范带动作用，经常送教下乡，资助贫困学生，支援乡村教育。她是北京外国语大学和外研社聘请的英语教师培训专家，曾赴陕西延安对中小学英语教师进行教学培训，在辽宁省中西部地区教学主任培训会上主讲“教学管理与学校特色课程”，多次到各地进行教学交流及班主任工作培训。刘晓辉积极参政议政，建言献策，主动服务社会，2018年被民进中央授予“全国思想宣传工作先进个人”。

28. 王秀霞

开原市莲花镇石龙村党支部书记、村主任、村妇联主席

王秀霞于2007年开始担任石龙村党支部书记兼村主任。全村446户人家，1575口人，都装在她的心里，谁家有困难她都会帮助解决，村里的老老少少都把她当成“家里人”。她带领班子成员和村民一起修建大型桥梁，使村子的沟沟叉叉都通了公路。她带头利用荒山秃岭修建起了果园，引进畅销的“寒富苹果”，带领村民走上了致富奔小康的道路。在王秀霞的辛勤努力下，村里旧貌换新颜，人民生活水平得到了很大的提高，石龙村也成为开原市的文明社区。

29. 陈丽伟

建平县总工会教文卫工会主席

陈丽伟发挥工会干部作用，立足本职，服务职工群众，认真做好五一劳动奖及工人先锋号评选等工作，放弃休息日，为605个基层工会组织录入信息并发放法人资格证书。勇于创新，想职工群众之所想，急职工群众之所急，充分利用业余时间，拓展服务职工的项目范围，创新服务职工形式，创建了家庭型食堂，解决了5个家庭，10余名职工及3名学生中午就餐问题，得到了职工的欢迎与认可。

30. 艾雅芝

喀左金鼎紫陶文化产业研发有限公司艺术总监

艾雅芝潜心钻研紫砂传统技艺，多篇论文在国内陶瓷杂志发表，获得多项国家专利。其作品被中国紫砂博物馆和中国陶瓷馆永久收藏。紫砂系列作品被中联部选为国礼。第十二届全运会召开期间，她代表朝阳艺人向大会捐赠了亲手制作的紫砂壶。她带领团队组建了喀左县紫陶研究所、喀左县北陶紫砂技术培训学校和喀左县青年创业孵化基地，免费培训紫砂产业人才一千多人次，基地被喀左县妇联授予巾帼创业培训基地。曾荣获辽宁省工艺美术大师、辽宁省女子工艺美术大师、辽宁省陶瓷艺术大师称号。

31. 国艳华

朝阳市市政工程管理处第三项目部经理

国艳华倾心市政事业，参与、组织施工项目数十项，全力创建民心工程、精品工程。组织施工的文化路拓宽改造工程和长江路拓宽改造工程等被评为“辽宁省市政金杯示范工程”。她重视安全文明施工，将风险损失降到最低。她对降低施工项目成本有特殊的管理办法，切实做到了开源节流。在人员管理中她注重公平分配，充分发挥人才效能；她关心帮助职工，耐心做后进职工思想工作；她热心公益，参与并组织爱心团队，经常为困难群众送温暖。

32. 吴春艳

喀左县白塔子镇政府农业服务站职员

吴春艳从事农业技术推广工作23年，推广了大量新品种和多项先进适用技术，促进了农民增收，农业增效，实现了全镇设施农业的快速发展。她参与完成了国家、省、市、县多项科研项目和推广项目，均取得显著经济效益和社会效益。先后完成了《保护地蔬菜国外优良品种的筛选》项目、《保护地蔬菜测土配方施肥技术推广》项目、《日光温室生物秸杆反应堆应用推广》等项目，对本地农业经济发展起到了积极的推动作用。

33. 李亚萍

盘锦京环公司辽东湾分公司作业中心一班班长

李亚萍是一名普通却不平凡的道路清扫保洁员。她多次主动选择作业任务重、处于商网密集主干路进行清扫保洁工作，每天清扫保洁面积约8000平方米，每天巡视路段长达8小时以上。李亚萍在管理班组时一直秉承着“安全生产、团结一致”的工作理念，班组内多年无安全责任事故。班组成员多次捡到手机、钱包等个人财务，都上报寻找失主，从未接受过失主金钱上的感谢。李亚萍先后参与了第十三届辽宁省全运会、盘锦市红海滩国际马拉松等大型活动的保洁工作，出色完成工作任务，赢得社会认可。

34. 刘胜红

盘锦姐妹家政服务有限公司母婴护理指导、家政培训师

刘胜红拥有国家高级营养师、育婴师、高级早教指导师等多项执业资格证书。她先后在盘锦市劳动就业指导中心、盘锦市妇联、大洼志红青年点等地培训指导，培训学员超千人，带动下岗职工和农村姐妹从事家政行业，共同致富发展。她先后获得盘锦市首届职工技能大赛家政冠军、盘锦市第九届职业技能大赛养老护理第二名，指导选手荣获第二届辽宁省“新风采”家政职业技能大赛母婴护理状元和辽宁省巾帼职业技能大赛团体冠军。

代母与孩子的血缘关系

35. 吕桂华

盘山县沙岭镇妇联专职副主席

三十多年来，吕桂华在妇联工作岗位上默默奉献。她通过组成五支党的十九大巾帼宣讲团文艺巡演队，开展形式多样的学习巡演活动，引领妇女坚定不移听党话、跟党走；她带动妇女姐妹成立花卉种植合作社，安置48名妇女就业；帮助花卉种植户和有致富需求的妇女协调农行盘山县支行发放妇女创业小额贴息贷款1380多万元，惠农贷款520万元，为妇女增收致富提供了资金扶持；她利用节假日，走访贫困家庭，为她们解决实际困难；她为留守妇女和老人开办手工艺品制做、草苇编织辅导班, 吸纳近千名妇女在“无围墙工厂”就业。

文章来源：省妇联宣传部

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